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PCR實(shí)驗室布局、通風(fēng)系統設計及壓力控制

發(fā)表時(shí)間: 2020-12-18

PCR實(shí)驗室又叫基因擴增實(shí)驗室。PCR是聚合酶鏈式反應(PolymeraseChainReaction)的簡(jiǎn)稱(chēng)。是一種分子生物學(xué)技術(shù),用于放大特定的DNA片段,可看作生物體外的特殊DNA復制。用于基因檢測,具有高度敏感性、特異性、快速、簡(jiǎn)單等特點(diǎn),能將傳統方法難以檢測的極少數病毒DNA片段擴增百萬(wàn)倍以上,從而大大提高疾病的診斷水平。它不僅可用于基因分離、克隆和核酸序列分析等基礎研究,還可用于疾病的診斷或任何有DNA,RNA的地方,又稱(chēng)無(wú)細胞分子克隆或特異性DNA序列體外引物定向酶促擴增技術(shù)。

一、PCR實(shí)驗室平面布局

PCR擴增檢驗實(shí)驗室原則上分為三個(gè)單獨的工作區域:試劑貯存和準備區、標本制備區、擴增和擴增產(chǎn)物分析區。為避免交叉污染,進(jìn)入各個(gè)工作區域必須嚴格遵循單一方向進(jìn)行,即只能從試劑貯存和準備區→標本制備區→擴增和擴增產(chǎn)物分析區。各實(shí)驗區之間的試劑及樣品傳遞應通過(guò)傳遞窗進(jìn)行。

二、實(shí)驗室空調通風(fēng)系統設計及壓力控制

PCR實(shí)驗室并沒(méi)有嚴格的凈化等級要求,但是為避免各個(gè)實(shí)驗區域間交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣流組織形式。同時(shí),要嚴格控制送、排風(fēng)的比例以保證各實(shí)驗區的壓力要求。

1、試劑貯存和準備區

該實(shí)驗區主要進(jìn)行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應直接運送至該區,不得經(jīng)過(guò)其他區域。試劑原材料必須貯存在本區內,并在本區內制備成所需的貯存試劑。對與氣流壓力的控制,本區應對外界保持微正壓。

2、標本制備區

該區域主要進(jìn)行的操作為樣本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定DNA的合成。本區的壓力梯度要求為:相對于鄰近區域為正壓,以避免從鄰近區進(jìn)入本區的氣溶膠污染。另外,由于在加樣操作中可能會(huì )發(fā)生氣溶膠所致的污染,所以應避免在本區內不必要的走動(dòng)。

3、擴增和擴增產(chǎn)物分析區

該區域主要進(jìn)行的操作為DNA擴增和擴增片段的測定。此外,已制備的DNA模板(來(lái)自樣本制備區)的加入和主反應混合液(來(lái)自試劑貯存和制備區)制備成反應混合液等也可在本區內進(jìn)行。本區的壓力梯度要求為:相對于鄰近區域為負壓,以避免氣溶膠從本區漏出。為避免氣溶膠所致的污染,應盡量減少在本區內的不必要的走動(dòng)。個(gè)別操作如加樣等應在超凈臺內進(jìn)行。

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